Production and evaluation of chicken antibodies against a synthetic peptide from glial growth factor / Producción y evaluación de anticuerpos de gallinas contra un péptido sintético del factor de crecimiento glial

Neuregulins (NRG) are proteins that belong to the family of epidermal growth factors. It is well established that these factors are essential for the development and maintenance of the nervous system. Due to the difficulty of purifying enough quantities of these factors and the lack of specificity from commercially available antibodies, the aim of this work was to produce antibodies against a synthetic peptide capable to detect and identify neuregulin GGFb isoforms. To accomplish this goal, polyclonal antibodies were raised in hens against a synthetic peptide designed from the GGFb1 extracellular sequence. The sequence analysis was made using different epitope-predicting programs. Our results showed that the peptide sequence selected was immunogenic because it was capable of inducing a specific type B immune response in the experimental animal model. These antibodies were also capable of recognizing a recombinant GGF protein and GGF isoforms present in different samples. Our results suggest that the development of immunoglobulin Y (IgY) using synthetic peptides represents, a valuable tool for neuroscience research.

Las Neuregulinas (NRG) son proteínas que pertenecen a la familia de los factores de crecimiento epidermal. Se ha demostrado que estos factores son esenciales para el desarrollo y mantenimiento de la funcionalidad del sistema nervioso. Debido a la dificultad para purificar estas proteínas y la falta de especificidad de los anticuerpos disponibles comercialmente, el objetivo de este trabajo fue producir anticuerpos contra un péptido sintético capaz de detectar e identificar una isoforma de la Neuregulina (GGFb). Para lograr este objetivo, se desarrollaron anticuerpos en gallinas (IgY) contra un péptido sintético diseñado a partir de la secuencia aminoacídica de la región extracelular de GGFb, utilizando programas de predicción de epítopes. Los resultados demuestran que el péptido seleccionado fue immunogénico debido a que estimuló una respuesta inmune específica tipo B en el modelo utilizado. Estos anticuerpos fueron también capaces de reconocer una proteína recombinante e isoformas de GGF presentes en diferentes muestras biológicas. Nuestros resultados demuestran el potencial valor de las inmunoglobulinas Y (IgY) contra péptidos sintéticos como una herramienta de aplicación para la investigación en neurociencia.

Producción y evaluación in vitro de IgY contra Streptococcus mutans / In vitro production and evaluation of anti-Streptococcus mutans IgY

La caries dental es una enfermedad infecciosa de alcance mundial, producida por Streptococcus mutans. Una estrategia para combatir la bacteria es previniendo su adherencia al esmalte dental mediante el uso de inmunoglobulinas de yema de huevo (IgY). En este trabajo se desarrollaron IgY contra S. mutans y se determinó su reactividad a fin de evaluar su potencial para prevenir la caries dental. Los anticuerpos fueron producidos inmunizando gallinas con un liófilo de la bacteria. Se recolectaron los huevos pre y post inmunes y se purificaron las IgY por precipitación con PEG 6000-cloroformo. El mayor nivel de IgY se obtuvo en el día 42 postinmunización, medido por un ensayo ELISA y la reactividad se evaluó por Western Blot, observándose el reconocimiento de bandas específicas entre 41 y 150 kDa que corresponden a proteínas implicadas en la adherencia a la superficie dental. Por la prueba MABA, se observó reactividad cruzada con S. salivarius. Observamos la aglutinación e inhibición del crecimiento (MIC) de S. mutans in vitro por acción de las IgY. Los resultados demuestran el potencial de estos anticuerpos para ser aplicados en ensayos de inmunización pasiva en nuestro país como una alternativa para prevenir la caries dental.

Dental caries is a worldwide infectious disease produce by Streptococcus mutants. A strategy to combat this bacterium consists in preventing its adherence to tooth enamel through the use egg yolk immunoglobulin (IgY). In this study we developed anti-S.mutans IgY and determined its reactivity to evaluate its potential for preventing dental caries. The antibodies were produced by immunizing hens with lyophilized bacteria. Pre and post immunization eggs were collected and their IgY was purified by precipitation with PEG 6000-chloroform. The highest IgY level was obtained on the 42nd day post-immunization, as measured by an ELISA test. Reactivity was determined by Western Blot, showing the recognition of specific bands between 41 and 150 kDa, which correspond to proteins involved in the adherence to dental surfaces. A MABA test showed cross-reactivity with S. salivarum. IgY activity was shown by in vitro agglutination and growth inhibition (MIC) of S. mutans. These results show the potential of these antibodies for application in passive immunization trials as an alternative to prevent dental caries.